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細(xì)胞詳述

 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，對骨髓中的造血干細(xì)胞（HSC）不僅有機(jī)械支持作用，還能分泌多種生長因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）來支持造血。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)具有多向分化潛能，能促進(jìn)間充質(zhì)組織的再生，如：骨、軟骨、肌肉、韌帶、肌腱、脂肪及基質(zhì)等組織。在骨髓中，BMSCs占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.001%~0.1%，含量極低。而同時(shí)，由于組織工程需要大量的種子細(xì)胞，從嚙齒類動(dòng)物骨髓分離BMSCs的技術(shù)上的難度限制了許多實(shí)驗(yàn)的開展。體外分離培養(yǎng)純度高、活力強(qiáng)、生物特性均一的BMSCs對組織工程及細(xì)胞的體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)顯得至關(guān)重要。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。（轉(zhuǎn)染后此細(xì)胞帶有嘌呤霉素抗性）。

注意事項(xiàng)：  收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基，不能用來培養(yǎng)細(xì)胞。

細(xì)胞篩選

該細(xì)胞為已經(jīng)構(gòu)建好的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細(xì)胞，隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加，其GFP熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度，可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。 建議收到細(xì)胞后至少傳3代，凍存留種后再進(jìn)行篩選。

初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí)，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無細(xì)胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細(xì)胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

細(xì)胞特性:

1） 組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常骨髓血組織。

2） 細(xì)胞鑒定：CD44免疫熒光染色為陽性。

3） 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

5） 細(xì)胞生長方式：長梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基

推薦使用小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞-永生化+GFP細(xì)胞專用培養(yǎng)（iCell-0117a-001b）作為體外培養(yǎng)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞-永生化+GFP細(xì)胞的培養(yǎng)基。

產(chǎn)品的運(yùn)輸和保存：

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1) 1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

2) T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

產(chǎn)品使用

1) 本產(chǎn)品僅能用于科研

2) 本產(chǎn)品未通過直接用于活體動(dòng)物和人的審核

3) 本產(chǎn)品未通過用于活體診斷的審核