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儲(chǔ)存條件：2-8°C

應(yīng)用：定量檢測(cè)小鼠血清、血漿、細(xì)胞液、體液以及組織勻漿中IFNγ的含量

（本指標(biāo)為反向競(jìng)爭(zhēng)法試劑盒，詳細(xì)實(shí)驗(yàn)原理以英文為準(zhǔn)，產(chǎn)品相關(guān)文檔處可下載詳細(xì)說(shuō)明書(shū)）

用途：本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一． 試劑盒組成

注意：平衡液僅僅適用于標(biāo)本是細(xì)胞液、體液以及組織勻漿樣品的檢測(cè)時(shí)所使用

二．樣本處理及保存：

1. 血清

采集血清時(shí)不加抗凝劑，采集后室溫靜置1-2小時(shí)，1000 × g (或3000 rpm)離心15分鐘，取上清，-20℃或-80℃分裝保存?zhèn)溆谩?/span>

2. 血漿

采集血漿，要加入總體積1%的抗凝劑 (EDTA，肝素等)，采集后先室溫或4℃靜置半小時(shí)后，1000 × g (或3000 rpm)離心15分鐘，取上清，-20℃或-80℃分裝保存?zhèn)溆谩?/span>

3. 組織裂解液

組織裂解的方式取決于組織的類型，一般來(lái)講，先用預(yù)冷的PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2) 清洗組織后稱重。一般0.5g組織加入500ul預(yù)冷的PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2)，在冰上的玻璃容器內(nèi)研碎。用超聲或者反復(fù)凍融的方法裂解細(xì)胞膜，1500×g (或5000 rpm) 離心15分鐘后取上清，-20℃或-80℃分裝保存?zhèn)溆谩?/span>

4. 細(xì)胞裂解液

1) 懸浮細(xì)胞直接離心取細(xì)胞沉淀。貼壁細(xì)胞需用胰酶消化后離心取細(xì)胞沉淀。檢測(cè)某些指標(biāo)時(shí)不能用胰酶消化。

2) 用PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2) 洗3遍。

3) 用少量PBS重懸細(xì)胞，超聲或者反復(fù)凍融的方法裂解細(xì)胞膜，1500×g (或5000 rpm) 離心15分鐘后取上清，-20℃或-80℃分裝保存?zhèn)溆谩?/span>

5. 細(xì)胞上清及體液

1000 × g (或3000 rpm)離心15分鐘，取上清，-20℃或-80℃分裝保存?zhèn)溆谩?/span>

三．試劑準(zhǔn)備

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書(shū)要求保存。

2. 洗液的配制：按1:100的比例配制洗液備用。

四．操作步驟（實(shí)驗(yàn)前必須仔細(xì)看實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備）

1. 取出試劑盒，于室溫（20-25℃）放置30分鐘。

2. 取出酶標(biāo)板，按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入100 μL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。

3. 空白微孔中加入100 μL的樣品，空白對(duì)照加入100 μL的蒸餾水。

4. 加10 μL的平衡液于已加樣品的孔中（不含空白對(duì)照孔），如果標(biāo)本是血清或者血漿，此步驟忽略。

5. 在各孔中加入50 μL的酶標(biāo)記溶液（不含空白對(duì)照孔）。

6. 將酶標(biāo)板用封口膠密封后，37℃孵育反應(yīng) 1小時(shí)（在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度）。

7. 充分清洗酶標(biāo)板5次，保持各孔有充足的水壓（濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋）。

8. 酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙徹底拍干。

9. 各孔加入顯色劑A 50 μL。

10. 各孔加入顯色劑B 50 μL。

11. 37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘。

12. 各孔加入50 μL終止液，終止反應(yīng)。

13. 將微孔板至于450nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀下進(jìn)行讀值（吸光度值即為OD值）。

五．實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1. 實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。

2. 加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免第一孔與最后一孔之間的時(shí)間間隔過(guò)大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性；一般加樣時(shí)間控制在10分鐘內(nèi)，如果樣本數(shù)量過(guò)多，可使用多道移液器。

3. 孵育：樣品要在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行孵育，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。

4. 洗滌：洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指痕跡，避免影響最后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。

5. 反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如，10分鐘左右），如果顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。

6. 建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

7. 建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個(gè)標(biāo)本），如果對(duì)本試劑盒有任何疑問(wèn)，可和所購(gòu)經(jīng)銷商聯(lián)系，如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。