1、總述
酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法
1971年瑞典學(xué)者Engvail和Perlmann,荷蘭學(xué)者Van
Weerman和Schuurs分別報(bào)道將免疫技術(shù)發(fā)展為檢測(cè)體液中微量物質(zhì)的固相免疫測(cè)定方法,即酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法 (enzyme-linked
immunosorbent assay , ELISA) 。ELISA已成為分析化學(xué)領(lǐng)域中的前沿課題
,它是一種特殊的試劑分析方法,是在免疫酶技術(shù)( immunoenzymatic techniques )
的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新型的免疫測(cè)定技術(shù) 。
2、基本原理
它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測(cè)物與酶連接,然后通過(guò)酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),用于定量測(cè)定。測(cè)定的對(duì)象可以是抗體也可以是抗原。
在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑) ②酶標(biāo)記的抗原或抗體(標(biāo)記物)③酶作用的底物(顯色劑)
測(cè)量時(shí),抗原(抗體)先結(jié)合在固相載體上,但仍保留其免疫活性,然后加一種抗體(抗原)與酶結(jié)合成的偶聯(lián)物(標(biāo)記物),此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性,當(dāng)偶聯(lián)物與固相載體上的抗原(抗體)反應(yīng)結(jié)合后,再加上酶的相應(yīng)底物,即起催化水解或氧化還原反應(yīng)而呈顏色。
其所生成的顏色深淺與欲測(cè)的抗原(抗體)含量成正比。 這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡觀察,也可以用分光光度計(jì)(酶標(biāo)儀)加以測(cè)定。其方法簡(jiǎn)單,方便訊速,特異性強(qiáng)。
3、分類
該法由種類和變化可分為以下幾種:
(一)雙抗體夾心法
(二)間接法
(三)競(jìng)爭(zhēng)法
(四)雙位點(diǎn)一步法
(五)捕獲法測(cè)IgM抗體
(六)應(yīng)用親和素和生物素的ELISA
4、特點(diǎn)
該法相較其他方法而言,有幾大特點(diǎn):
靈敏性高
該測(cè)定法的靈敏度來(lái)自作為報(bào)告集團(tuán)的酶。眾所周知,
酶是一種有機(jī)催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng) ,產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。ELISA實(shí)現(xiàn)了在細(xì)胞或亞細(xì)胞
水平上示蹤抗原或抗體的所在部位,或在微克、甚至納克水平上對(duì)其進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)
其特異性來(lái)自抗體或抗原的選擇性。抗原抗體的結(jié)合實(shí)質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系,所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。
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